ଜେନେଟିକ୍ ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ, ଆମେ ପ୍ରାୟତ in ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ RNA ନମୁନାକୁ ସାମ୍ନା କରିଥାଉ, ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, କ୍ଷୁଦ୍ର ଆନାଟୋମିକାଲ୍ ମ oral ଖିକ ଟ୍ୟୁମର୍, ଏପରିକି ଏକକ-କୋଷର ନମୁନା, ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜିନ୍ ମ୍ୟୁଟେସନର ନମୁନା ଯାହା ମାନବ କୋଷରେ ଅତି ନିମ୍ନ ସ୍ତରରେ ଲିପିବଦ୍ଧ ହୋଇଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, COVID-19 ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ, ଯଦି ସ୍ ab ାବ୍ ସଠିକ୍ ସ୍ଥାନରେ ନଥାଏ କିମ୍ବା ନମୁନା ସଂଗ୍ରହ ସମୟରେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ସମୟ ନଥାଏ, ତେବେ ନମୁନା ଆକାର ବହୁତ କମ୍ ହେବ, ଯେଉଁଥିପାଇଁ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଏବଂ ପରିବାର ଯୋଜନା ଆୟୋଗ ଦୁଇ ଦିନ ପୂର୍ବରୁ ବାହାରିଥିଲେ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷାରେ ଉତ୍ତୀର୍ଣ୍ଣ ହେଲେ, ଏବଂ ଯଦି ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ନମୁନା six ଟି ନମୁନା ନେଇ ନଥାଏ, ତେବେ ଆପଣ ଏହାକୁ ରିପୋର୍ଟ କରିପାରିବେ |
ରିଜେଣ୍ଟର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ ଆମର ଏହି ସମସ୍ୟା ବା ସେହି ସମସ୍ୟା ଅଛି, ତେବେ ଆମେ RT-PCR ର ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବା ପାଇଁ କ’ଣ କରିପାରିବା?
ଆମେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ସମାଧାନ ବିଷୟରେ ଆଲୋଚନା କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ଆସନ୍ତୁ ଆମେ ବର୍ତ୍ତମାନ ଉଲ୍ଲେଖ କରିଥିବା ପରିସ୍ଥିତି ସହିତ ଦୁଇଟି ବଡ ଜଟିଳତା ବିଷୟରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରିବା |
ସର୍ବପ୍ରଥମେ, ଯେତେବେଳେ ଆମର ନମୁନାରେ ଆମର ଅଳ୍ପ କିଛି ସେଲ୍ ଜନସଂଖ୍ୟା ଥାଏ, ଆମେ RNA କ୍ଷତି ବିଷୟରେ ଚିନ୍ତା କରୁ |ଯଦି ପାରମ୍ପାରିକ ପୃଥକତା ଏବଂ ସଫେଇ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ, ଯେପରିକି ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ରଣାଳୀ କିମ୍ବା ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟିକ୍ ଏସିଡ୍ ବୃଷ୍ଟିପାତ ପ୍ରଣାଳୀ, ଅଳ୍ପ ନମୁନା ନଷ୍ଟ ହେବାର ଏକ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ଭାବନା ଅଛି |ଗୋଟିଏ ସମାଧାନ ହେଉଛି ଏକ ବାହକ ଅଣୁ ଯୋଗ କରିବା, ଯେପରିକି tRNA, କିନ୍ତୁ ତା’ପରେ ମଧ୍ୟ, ଆମର ପୁନରୁଦ୍ଧାର ପରୀକ୍ଷଣ ଠିକ ଅଛି ବୋଲି କ guarantee ଣସି ଗ୍ୟାରେଣ୍ଟି ନାହିଁ |
ତେବେ ଏକ ଉତ୍ତମ ଉପାୟ କ’ଣ?ସଂସ୍କୃତ କୋଷ ବା ମାଇକ୍ରୋନାଟୋମିକାଲ୍ ନମୁନା ପାଇଁ ଏକ ଭଲ ବିକଳ୍ପ ହେଉଛି ସିଧାସଳଖ ଲାଇସିସ୍ ବ୍ୟବହାର କରିବା |
ଧାରଣା ହେଉଛି କୋଷଗୁଡ଼ିକୁ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବିଭକ୍ତ କରିବା, RNA କୁ ସମାଧାନରେ ମୁକ୍ତ କରିବା, ତା’ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ 2 ମିନିଟ୍ ବନ୍ଦ କରିବା, ତା’ପରେ ଲାଇସେଟ୍କୁ ସିଧାସଳଖ ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଯୋଡିବା ଯାହା ଦ୍ no ାରା କ R ଣସି RNA ନଷ୍ଟ ହୁଏ ନାହିଁ ଏବଂ ଶେଷରେ ଫଳାଫଳ cDNA କୁ ସିଧାସଳଖ ରଖ | ବାସ୍ତବ ସମୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ |
କିନ୍ତୁ ଯଦି, ଏକ ସୀମିତ ପ୍ରାରମ୍ଭ ବିନ୍ଦୁ କିମ୍ବା ଅଳ୍ପ ପରିମାଣର ଟାର୍ଗେଟ୍ ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ହେତୁ, ଆମେ ସମସ୍ତ RNA କୁ ପୁନ y ବ୍ୟବହାର କରିପାରିବା ଏବଂ ଏକ ଭଲ ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ପାଇବା ପାଇଁ ତଥାପି ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଟେମ୍ପଲେଟ୍ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବୁ ନାହିଁ?
ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ପ୍ରି-ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ଷ୍ଟେପ୍ ବହୁତ ଉପଯୋଗୀ ହୋଇପାରେ |
ଓଲଟା ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପରେ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବ to ାଇବାକୁ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଯୋଜନା |ଆରମ୍ଭ କରିବା ପୂର୍ବରୁ, ଆମେ ଡାଉନଷ୍ଟ୍ରିମକୁ ପଚାରିବା ଆବଶ୍ୟକ, କେଉଁ ଟାର୍ଗେଟରେ ଆମେ ଆଗ୍ରହୀ, ତେଣୁ ପ୍ରି-ଏମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପାଇଁ ଏହି ଟାର୍ଗେଟ୍ ପାଇଁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର୍ ଡିଜାଇନ୍ କରିବା |
100 ଯୁଗଳ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ 10 ରୁ 14 ଥର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଚକ୍ର ସହିତ ଏକ ମିଶ୍ରିତ ପ୍ରାଇମର୍ ସୃଷ୍ଟି କରି ଏହା ହାସଲ ହୋଇପାରିବ |ତେଣୁ, ଏହି ଆବଶ୍ୟକତା ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ଏକ ମାଷ୍ଟର ମିକ୍ସ ପ୍ରାପ୍ତ cDNA କୁ ପୂର୍ବ-ବ pl ାଇବା ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ |
10 ରୁ 14 ମଧ୍ୟରେ ଚକ୍ର ସଂଖ୍ୟା ସ୍ଥିର କରିବାର କାରଣ ହେଉଛି ଏହି ସୀମିତ ସଂଖ୍ୟକ ଚକ୍ର ବିଭିନ୍ନ ଲକ୍ଷ୍ୟ ମଧ୍ୟରେ ଅନିୟମିତତା ସୁନିଶ୍ଚିତ କରେ, ଯାହା ପରିମାଣିକ ମଲିକୁଲାର ସୂଚନା ଆବଶ୍ୟକ କରୁଥିବା ଅନୁସନ୍ଧାନକାରୀଙ୍କ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଟେ |
ପ୍ରି-ଆମ୍ପ୍ଲାଇଫେସନ୍ ପରେ, ଆମେ ବହୁ ପରିମାଣର cDNA ପାଇପାରିବା, ଯାହା ଦ୍ the ାରା ବ୍ୟାକ୍-ଏଣ୍ଡରେ ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା ବହୁତ ଉନ୍ନତ ହୁଏ, ଏବଂ ଆମେ ନମୁନାକୁ ହ୍ରାସ କରି ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଅନିୟମିତ ତ୍ରୁଟି ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଏକାଧିକ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମଧ୍ୟ କରିପାରିବା |
ପୋଷ୍ଟ ସମୟ: ଏପ୍ରିଲ -11-2023 |